研究目的
阐明荧光蛋白发色团结构的光学特性。
研究成果
获得了高质量的类绿色荧光蛋白拉曼光谱，揭示了独特的标记谱带以及C5=C6拉曼谱带位移与激发能之间的正线性相关性，有助于更深入地理解其光学特性及在蛋白质设计中的潜在应用。
研究不足
该研究可能无法推广至未测试的其他荧光蛋白，且拉曼波段位移与光稳定性之间的相关性尚需进一步实验验证。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用785纳米激发光的拉曼光谱技术获取荧光蛋白的拉曼光谱，重点检测发色团振动特征，同时最大限度减少荧光干扰和光降解影响。
2：样本选择与数据来源：
样本包含来自水母的增强型均质荧光蛋白EGFP、EYFP、ECFP及来自海葵的mNeptune，通过特定引物和载体在大肠杆菌TG1中表达并纯化获得。
3：实验设备与材料清单：
设备包括雷尼绍inVia Reflex共聚焦拉曼显微镜、法国压榨器（JNBIO JN-02C）、Ni-NTA His-Bind树脂、Superdex-200分子排阻柱及KnowItAll软件；材料包含pQE30载体、大肠杆菌TG1、LB培养基、氨苄青霉素及各类缓冲液。
4：LB培养基、氨苄青霉素及各类缓冲液。 实验流程与操作规范：
4. 实验流程与操作规范：蛋白质在大肠杆菌中表达后经色谱纯化，使用785纳米激光（功率50毫瓦/平方厘米）检测样品表面下200-300微米区域的拉曼光谱，积分时间60秒。
5：数据分析方法：
原始数据通过KnowItAll软件进行平滑处理，并基于官能团数据库及参考文献完成拉曼谱峰归属。
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pQE30 vector
pQE30
Qiagen
Used for cloning and expressing fluorescent protein genes.
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Ni-NTA His-Bind resin
Ni-NTA His-Bind
GE Healthcare
Used for purification of histidine-tagged proteins.
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Superdex-200 size exclusion column
Superdex-200
GE Healthcare
Used for size exclusion chromatography to purify proteins.
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French pressure cell
JN-02C
JNBIO
Used for cell lysis to extract proteins.
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confocal Raman microscope
inVia Reflex
Renishaw
Used to acquire Raman spectra of protein samples.
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KnowItAll software
KnowItAll
Bio-Rad
Used for processing and analyzing Raman spectra data.
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