研究目的
评估405纳米蓝光对成熟生物膜中生长的碳青霉烯酶产生肠杆菌科（CPE）菌株的抗菌活性。
研究成果
405纳米蓝光能有效减少体外成熟CPE生物膜的定植，且暴露时间越长效果越显著。该技术有望成为临床与环境应用的净化剂，具备开发为实用设备的潜力。未来研究应探索其在多种表面及混合微生物环境中的效果。
研究不足
仅对12株产blaNDM、blaKPC和blaOXA-48的肺炎克雷伯菌和大肠杆菌CPE分离株进行了小规模测试。实验针对聚苯乙烯表面的单微生物生物膜，未测试其他材料或多微生物生物膜。剂量反应关系并不直接，且有一株分离株显示出敏感性降低。需要对其他碳青霉烯酶（如blaVIM、blaIMP）、不同材料以及与传统去污方法的比较进行进一步研究。
1：实验设计与方法选择：
采用最小生物膜根除浓度（MBEC）体外实验评估405纳米蓝光对耐碳青霉烯类肠杆菌（CPE）临床分离株成熟生物膜的杀菌效果。理论依据基于蓝光的固有抗菌特性及既往研究显示其对生物膜的作用。
2：样本选择与数据来源：
英国伯明翰伊丽莎白女王医院多来源的12株临床CPE分离株（8株肺炎克雷伯菌、1株产酸克雷伯菌、3株大肠埃希菌）。根据遗传多样性和抗生素耐药谱筛选菌株，通过PCR和分型技术（VNTR和MLST）确认。
3：实验设备与材料清单：
用于发射蓝光的LED泛光阵列（汉高-乐泰）、USB2000光谱仪（海洋光学）进行光谱测量、96孔微量滴定板、聚丙烯挂壁板（星实验室）、LB肉汤、MH肉汤、结晶紫、无菌水、乙醇、Protect?保存珠、CLED或血琼脂培养基。
4：实验流程与操作步骤：
过夜培养物稀释至MH肉汤OD600值为0.1，接种于含挂壁板的96孔板中，33℃培养72小时形成生物膜。生物膜经洗涤后暴露于60 mW/cm2蓝光下5/15/30分钟（对应剂量162/54/108 J/cm2），对照组用锡箔包裹。照射后将挂壁板置于报告肉汤中过夜孵育，测定OD值评估生物膜再接种量。通过结晶紫试验确认生物膜生物量。
5：1，接种于含挂壁板的96孔板中，33℃培养72小时形成生物膜。生物膜经洗涤后暴露于60 mW/cm2蓝光下5/15/30分钟（对应剂量162/54/108 J/cm2），对照组用锡箔包裹。照射后将挂壁板置于报告肉汤中过夜孵育，测定OD值评估生物膜再接种量。通过结晶紫试验确认生物膜生物量。 数据分析方法：
5. 数据分析方法：利用光密度值计算生物膜再接种量的减少率。采用R软件（3.4.3版）进行统计分析，非正态数据使用Mann-Whitney U检验，p<0.05为显著差异。每个处理条件设置2个生物学重复和10个技术重复。
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