研究目的
研究光活性NADPH类似物NS1对内皮细胞和黑色素瘤细胞中NADPH依赖性一氧化氮与活性氧信号传导的调控机制，以阐明其对血管生成和细胞增殖的影响。
研究成果
NS1能有效抑制一氧化氮和活性氧的产生，减少血管生成和黑色素瘤细胞增殖，且不影响正常黑素细胞，揭示了eNOS与NOX4通路间的相互作用。该物质有望成为调节氧化应激和控制血管生成的工具，在未来抗血管生成治疗中具有应用潜力。
研究不足
NS1抑制的IC50值需进一步优化以适用于体内应用；目前尚未开发出针对特定亚型的抑制剂；关于NS1作用机制的详细研究正在进行中；且需更多体内研究来验证其治疗潜力。
1：实验设计与方法选择：
本研究采用光活性NADPH类似物NS1抑制NOS和可能的NOX酶，通过EPR光谱、流式细胞术、血管生成实验和蛋白质印迹法评估NO和ROS水平、细胞活力及信号通路。
2：样本选择与数据来源：
样本包括分离的小鼠主动脉环、人脐静脉内皮细胞（HUVECs）、A375黑色素瘤细胞及正常人黑素细胞（NHM），在特定条件下培养。
3：实验设备与材料清单：
设备包括EPR光谱仪（布鲁克Elexsys 500、MiniScop MS400）、流式细胞仪（FACS Calibur）、微孔板读数器（VICTOR X4）；试剂包含NS1、CellROX Deep Red试剂、DEPMPO、CAT1-H及多种抗体。
4：MiniScop MS400）、流式细胞仪（FACS Calibur）、微孔板读数器（VICTOR X4）；试剂包含NSCellROX Deep Red试剂、DEPMPO、CAT1-H及多种抗体。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：将细胞或组织与NS1或对照物孵育，通过自旋捕获和荧光法测定NO与ROS，利用基质胶评估血管生成，通过蛋白质印迹和流式细胞术分析细胞周期及蛋白表达。
5：数据分析方法：
采用统计方法（Student t检验、Bonferroni校正的ANOVA）分析数据，并对EPR和荧光测量的信号进行归一化与定量。
独家科研数据包，助您复现前沿成果，加速创新突破
获取完整内容-
EPR spectrometer
Elexsys 500
Bruker
Used for detecting paramagnetic species such as NO and superoxide ions via spin trapping in experiments with aortic rings and nNOS.
-
Microplate reader
VICTOR X4
PerkinElmer
Used for MTT assays to measure cell viability in HUVECs.
-
EPR spectrometer
MiniScop MS400
Magnetech
Used for kinetic measurements of superoxide ions in aortic rings using the CAT1-H probe.
-
Flow cytometer
FACS Calibur
Becton-Dickinson
Used for measuring ROS levels in HUVECs and A375 cells using CellROX Deep Red Reagent and for cell cycle analysis.
-
CellROX Deep Red Reagent
Invitrogen
Fluorescent probe for detecting intracellular ROS levels in HUVECs and A375 cells.
-
DEPMPO
Radical Vision
Spin trap for superoxide ions in EPR experiments with nNOS.
-
CAT1-H
Enzo Life Sciences
Spin probe for superoxide ions in EPR experiments with aortic rings.
-
MTT
Sigma-Aldrich
Reagent for cell viability assays in HUVECs.
-
L-NAME
Sigma-Aldrich
NOS inhibitor used as a control in experiments.
-
DPI
Inhibitor of flavoenzymes such as NOX and NOS reductase, used as a control.
-
VEGF antibody
Neomarkers
Used in western blotting to detect VEGF levels.
-
NOX4 antibody
Abcam
Used in western blotting to detect NOX4 protein levels.
-
Antibodies against Rb, p53, Erk, Hsp90, Akt, phospho-Akt, p21, p27, CdK6, cyclin A, cyclin D1, PARP cleaved, eNOS, Pro-Caspase 3
Santa Cruz, Cell Signaling Technology, BD Biosciences
Used in western blotting to analyze signaling pathways and cell cycle factors.
-
Griess reagent kit
Promega
Used to measure NO-derived species (NOx) in cell supernatants.
-
登录查看剩余12件设备及参数对照表
查看全部
