研究目的
开发并评估负载IR780和DOX的透明质酸功能化纳米颗粒,以增强癌症化疗-光热治疗效果,同时解决IR780水溶性差和细胞毒性等局限性问题。
研究成果
基于透明质酸的纳米颗粒成功包载了IR780和阿霉素,提升了IR780的光热性能与细胞相容性。该纳米颗粒在癌细胞中的摄取量高于正常细胞,能穿透三维球体结构,并展现出有效的化疗-光热联合治疗效果——当IR/DOX-HPN纳米制剂配合近红外光照时,可使球体细胞存活率降至34%。这些纳米制剂在癌症治疗中具有应用前景,但尚需进一步的活体研究验证。
研究不足
本研究仅限于体外模型(二维和三维细胞培养),建议未来通过体内评估来充分揭示其治疗潜力。光热效应可能受到近红外光下IR780降解的限制。
1:实验设计与方法选择:
本研究采用纳米沉淀法,以新型透明质酸基两亲性聚合物(HA-g-PMAO)制备纳米颗粒(IR-HPN和IR/DOX-HPN)。理论模型包括理化性质表征、光热效应及生物学实验。
2:样本选择与数据来源:
所用细胞系为MCF-7(乳腺癌细胞)和NHDF(正常人皮肤成纤维细胞),分别购自ATCC和Promocell。材料包括IR780碘化物、DOX、透明质酸钠盐及Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等供应商提供的各类化学品。
3:实验设备与材料清单:
设备包括用于动态光散射的Zetasizer Nano ZS、日立HT7700透射电镜、Evolution 201紫外-可见分光光度计、Spectramax Gemini EM荧光分光光度计、蔡司LSM 710共聚焦显微镜等。材料包含培养基、合成试剂及透析膜。
4:实验流程与操作步骤:
步骤包括HA-g-PMAO的合成、纳米沉淀法制备纳米颗粒、表征(粒径、zeta电位、包封率)、近红外激光照射下的光热研究、采用刃天青法的细胞相容性实验、通过共聚焦激光扫描显微镜进行的细胞摄取研究,以及二维和三维细胞模型中的疗效测试。
5:数据分析方法:
统计分析采用单因素方差分析(One-way ANOVA)结合Student-Newman-Keuls检验;数据以均值±标准差表示。图像分析使用ImageJ软件。
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Zetasizer Nano ZS
Nano ZS
Malvern Instruments Ltd.
Evaluating size distribution and zeta potential of nanoparticles using dynamic light scattering.
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Transmission Electron Microscope
HT7700
Hitachi Ltd.
Analyzing morphology of nanoparticles with staining and imaging at 100 kV accelerating voltage.
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UV-Visible Spectrophotometer
Evolution 201
Thermo Fisher Scientific Inc.
Measuring absorbance for encapsulation efficiency and loading content determination.
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Confocal Microscope
LSM 710
Carl Zeiss AG
Imaging cellular uptake and therapeutic effects using fluorescence channels.
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Spectrofluorometer
Spectramax Gemini EM
Molecular Devices LLC
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Irradiating samples for photothermal therapy studies at 808 nm wavelength.
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Freeze-drying nanoparticle samples for further analysis.
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Thermo Fisher Scientific
Culturing cells for in vitro assays.
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Seeding cells for confocal microscopy studies.
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Dialysis for nanoparticle purification and release studies.
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