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大鼠视网膜经AAV2介导的基因递送后体内荧光视网膜成像

DOI：10.1167/iovs.15-18862 期刊：Investigative Opthalmology & Visual Science 出版年份：2016 更新时间：2025-11-21 11:08:12
摘要： 目的：本研究旨在通过改良的定制共聚焦激光扫描显微镜进行活体视网膜成像，评估实验大鼠玻璃体内注射重组腺相关病毒2型（rAAV2-绿色荧光蛋白[GFP]）后的纵向基因表达模式。 方法：将10只9周龄Wistar大鼠分为两组：实验组（第1组）接受rAAV2-GFP玻璃体内注射，对照组（第2组）接受赋形剂。采用Zoletil腹腔注射麻醉后，使用33G汉密尔顿注射器向第1组大鼠玻璃体内注射8μL rAAV2-GFP，向第2组注射赋形剂。在rAAV或赋形剂给药后2、4、6和13天，于麻醉状态下获取活体荧光视网膜图像。 结果：从第1组大鼠玻璃体内注射rAAV2-GFP后第2天开始可观察到GFP荧光差异。在第4至6天之间，视网膜中的荧光强度和面积开始增加，并在第13天达到峰值。根据GFP表达模式，可识别神经纤维层神经节细胞的轴突。第2组中，接受赋形剂处理的眼在长达2周内仅显示有限区域的小量自发荧光，且在此期间强度未增加。 结论：活体视网膜成像证实，在玻璃体内注射rAAV2-GFP后2周内出现基因表达。大鼠视网膜中的基因转移和表达在2天内快速发生，并似乎在基因递送后2周内达到峰值?；钐迨油こ上窨赡苁且恢钟杏玫奈薮垂ぞ?，可用于随时间连续监测视网膜中的基因表达。
作者： Joo Yong Lee，Yoonha Hwang，Ji Hyun Kim，Yu Sun Kim，Bok Kyoung Jung，Pilhan Kim，Heuiran Lee
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研究概述 实验方案 设备清单

研究目的

本研究旨在通过改良的定制共聚焦激光扫描显微镜对实验大鼠玻璃体内注射重组腺相关病毒2（rAAV2-绿色荧光蛋白[GFP]）后进行活体视网膜成像，以评估纵向基因表达模式。

研究成果

体内视网膜成像证实，在玻璃体内注射rAAV2-GFP后2周内出现基因表达，表达从2天开始迅速启动，并在2周时达到峰值。该技术是一种无创工具，可用于视网膜基因表达的纵向监测，对基因治疗研究具有重要价值。

研究不足

该研究指出了一些局限性，例如注射导致的医源性晶状体和视网膜损伤，这在部分大鼠中引发了白内障，从而影响了图像质量。虽然定制的成像系统质量较高，但由于啮齿类动物眼睛的像差问题，其分辨率可能存在限制。该方法仅适用于玻璃体内注射，可能不适用于针对外层视网膜的视网膜下给药。

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