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受激拉曼散射显微镜中实现散粒噪声限制检测的优化信噪比

DOI:10.2971/jeos.2015.15022 期刊:Journal of the European Optical Society: Rapid Publications 出版年份:2015 更新时间:2025-11-21 11:08:12
摘要: 我们描述了一套受激拉曼散射(SRS)显微成像系统,该系统采用散粒噪声极限检测技术,适用于广泛的生物相关激光功率范围。通过该系统证明:当未调制光束与调制光束的时间平均功率比为1:2时,SRS散粒噪声极限检测可获得最高信噪比(SNR)。SRS技术中,两束不同波长的激光入射样品,若其能量差匹配分子振动能级,能量即可在光束间转移。通过对其中一束实施振幅调制,可测量该调制向另一束的转移效率——该过程效率直接反映焦域内目标分子数量。结合激光扫描显微技术,该方案可实现亚微米分辨率的快速高灵敏成像。虽然近期技术进步提升了SRS应用灵敏度,但实现散粒噪声极限检测的案例仍属少数。本SRS显微镜的主要噪声源来自未调制检测光束的散粒噪声。在假设光损伤与总激光功率呈线性关系的前提下,最佳信噪比会从信号最强的等功率比(1:1)偏移至1:2功率比。此条件下信噪比最大化且潜在光损伤总功率最小化。相较于1:1功率比,我们在聚苯乙烯微球和秀丽隐杆线虫样本中实现了图像质量提升及8%的信噪比增益。若分析中引入非线性损伤机制,随着非线性损伤阶数增加,最佳功率比将收敛于1:1。
作者: M. J. B. Moester,F. Ariese,J. F. de Boer
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为了证明在散粒噪声限制检测的受激拉曼散射(SRS)显微镜中,当未调制光束与调制光束的时间平均激光功率比为1:2时可获得最高信噪比(SNR),并从理论和实验上验证这一结论。

在广泛的生物相关激光功率范围内(样品总功率0.45-60毫瓦)实现了散粒噪声限制检测。确认在SRS显微镜中采用散粒噪声限制检测时,针对线性光损伤的最优信噪比出现在未调制光束与调制光束1:2的时间平均功率比条件下,较1:1比例提升8%信噪比。对于非线性光损伤,随着损伤阶数增加,最优比例趋于1:1。该优化方案无需硬件改动即可提升图像质量,尤其适用于生物样本中的低信号水平情况。

检测窗口的散粒噪声限制范围为样品总功率0.45至60毫瓦——下限受电子噪声制约,上限由光电二极管饱和决定。信噪比提升幅度较?。?%),且最佳功率比取决于可能随样品类型变化的photodamage机制。非线性损伤机制会使最佳比例向1:1偏移,精确优化需掌握损伤阶数信息。

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