研究目的
基于DAHK四肽开发一种高亲和力、高选择性的铜(II)离子荧光探针，并证明其在荧光寿命相关光谱中的应用，用于同时测量纳摩尔水平的游离探针和探针-铜复合物浓度，旨在研究铜在神经退行性疾病中的作用。
研究成果
合成的DAHK-TMBB探针对铜(II)离子表现出高亲和力与选择性，结合后荧光寿命显著缩短。通过荧光寿命测量和FLCS技术，可精确测定解离常数并同步量化纳摩尔级别的游离探针与复合物。该方法为研究铜在神经退行性疾病中的作用提供了体内研究基础，并适用于微型化检测。未来工作应优化探针设计与FLCS应用以实现更广泛的生物用途。
研究不足
当体系中镍离子（Ni2?）远过量于铜离子（Cu2?）时，探针的选择性可能受到影响，不过这在生物体系中并非主要问题。由于光子计数较低，低荧光DAHK-TMBB-Cu复合物的FLCS数据质量可能较差，从而影响解离常数测定的准确性。该方法需要TCSPC和FLCS等专业设备，限制了其普及性。未缓冲的滴定会得出无意义的KD值，仅适用于探针浓度定量。
1：实验设计与方法选择：
研究通过将四甲基BODIPY染料与DAHK四肽偶联合成了DAHK-TMBB探针。利用荧光寿命相关光谱（FLCS）基于荧光寿命差异测量特定物种的自相关函数。采用铜(II)离子滴定实验，分别使用和不使用金属离子缓冲液（NTA3?/CuNTA?）来控制游离铜浓度。
2：样本选择与数据来源：
探针DAHK-TMBB经合成并纯化（纯度>95%）。测量在PBS缓冲液（9 mM，NaCl调节离子强度154 mM，pH 7.54）或适合pH依赖性研究的Good's缓冲液中进行。金属盐和缓冲物质均购自商业渠道。
3：54）或适合pH依赖性研究的Good's缓冲液中进行。金属盐和缓冲物质均购自商业渠道。 实验设备与材料清单：
3. 实验设备与材料清单：紫外/可见及荧光分光光度计（Jasco V650、Jasco FP-6500）、量子产率测量系统（Hamamatsu Quantaurus-QY）、自制时间相关单光子计数（TCSPC）装置（含脉冲二极管激光器LDH-P-C-470B、激光驱动器PDL-808 Sepia、SPAD探测器PDM系列/SPCM-AQR-14、TCSPC电子元件PicoHarp 300）、软件（SymPhoTime 64）、倒置显微镜（Axiovert 200）、水浸物镜（C-Apochromat 63x/1.2 NA）、带通滤光片（HQ525/50）、二向色镜（z405/470rpc XT），化学试剂来自Sigma-Aldrich和Carl Roth。
4：Jasco FP-6500）、量子产率测量系统（Hamamatsu Quantaurus-QY）、自制时间相关单光子计数（TCSPC）装置（含脉冲二极管激光器LDH-P-C-470B、激光驱动器PDL-808 Sepia、SPAD探测器PDM系列/SPCM-AQR-TCSPC电子元件PicoHarp 300）、软件（SymPhoTime 64）、倒置显微镜（Axiovert 200）、水浸物镜（C-Apochromat 63x/2 NA）、带通滤光片（HQ525/50）、二向色镜（z405/470rpc XT），化学试剂来自Sigma-Aldrich和Carl Roth。 实验流程与操作步骤：
4. 实验流程与操作步骤：合成过程包括在THF中使Fmoc-DAHK与TMBB-Su反应，随后进行Fmoc脱?；げ⑼ü鼿PLC纯化。通过吸收和荧光光谱表征光谱特性。通过添加CuSO4或使用金属离子缓冲液进行荧光滴定，测量强度、寿命和FLCS。处理FLCS数据生成特定物种的自相关曲线。
5：数据分析方法：
使用SymPhoTime 64软件以双指数模型拟合荧光衰减。滴定数据拟合至推导方程（如公式5和公式9）以确定解离常数。应用FLCS滤波器提取特定物种的自相关函数，以三维扩散模型拟合。
独家科研数据包，助您复现前沿成果，加速创新突破
获取完整内容-
UV/Vis Spectrometer
V650
Jasco
Recording absorption spectra of the probe and complex.
暂无现货
预约到货通知
-
Fluorescence Spectrometer
FP-6500
Jasco
Recording fluorescence emission spectra.
暂无现货
预约到货通知
-
Quantum Yield Measurement System
Quantaurus-QY
Hamamatsu
Measuring quantum yields of the probe and complex.
暂无现货
预约到货通知
-
Pulsed Diode Laser
LDH-P-C-470B
PicoQuant
Excitation source for TCSPC and FLCS measurements at 470 nm.
暂无现货
预约到货通知
-
Laser Driver
PDL-808 Sepia
PicoQuant
Controlling the pulsed diode laser.
暂无现货
预约到货通知
-
TCSPC Electronics
PicoHarp 300
PicoQuant
Recording fluorescence and timing signals with high time resolution.
暂无现货
预约到货通知
-
Software
SymPhoTime 64
PicoQuant
Data acquisition and analysis for TCSPC and fluorescence lifetime measurements.
暂无现货
预约到货通知
-
Inverted Microscope
Axiovert 200
Carl Zeiss
Platform for FLCS measurements with objective and pinhole.
立即获取同款设备 -
Water Immersion Objective
C-Apochromat 63x/1.2 NA
Carl Zeiss
Focusing laser and collecting fluorescence in FLCS setup.
暂无现货
预约到货通知
-
SPAD Detector
SPCM-AQR-14
PerkinElmer
Detecting fluorescence photons for FLCS measurements.
暂无现货
预约到货通知
-
SPAD Detector
PDM series
Micro Photon Devices (MPD)
Detecting single photons for TCSPC measurements.
暂无现货
预约到货通知
-
Bandpass Filter
HQ525/50
AHF analysentechnik
Filtering emission light to select specific wavelengths.
暂无现货
预约到货通知
-
Dichroic Mirror
z405/470rpc XT
AHF analysentechnik
Reflecting laser light into objective and transmitting fluorescence.
暂无现货
预约到货通知
-
登录查看剩余11件设备及参数对照表
查看全部
