研究目的
利用铝等离子体激元增强紫外波段单蛋白自发荧光的研究。
研究成果
该研究首次展示了通过紫外铝等离子体增强单蛋白色氨酸自发荧光检测技术,能够在微摩尔浓度下以单分子灵敏度观测无标记β-半乳糖苷酶蛋白的色氨酸荧光,同时实现单分子亮度提升和微秒级穿越时间。
研究不足
单个蛋白质发出的紫外自荧光信号通常极其微弱,目前的检测灵敏度要求每个蛋白质约含有100个色氨酸残基,才能产生超过背景亮度的信号。
1:实验设计与方法选择:
该实验利用在不透明铝膜上加工的零模波导(ZMW)纳米孔,增强单蛋白在紫外波段内的色氨酸自发荧光发射。
2:样本选择与数据来源:
采用大肠杆菌来源的β-半乳糖苷酶蛋白,因其具有天然色氨酸紫外荧光特性。
3:实验设备与材料清单:
包含自建共聚焦显微镜(配备时间分辨荧光检测??椋?、铝制ZMW样品,以及用于激发的266纳米皮秒激光器。
4:实验流程与操作步骤:
将ZMW置于紫外共聚焦显微镜焦点处,通过落射荧光构型收集荧光信号。
5:数据分析方法:
运用荧光相关光谱(FCS)解析荧光强度时间轨迹,计算时间相关函数,评估ZMW检测体积内的平均分子数及平均扩散时间。
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