研究目的
研究激光诱导脉络膜新生血管(CNV)小鼠模型中循环微小RNA(cmiRNAs)的失调情况,以确定新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)的潜在生物标志物。
研究成果
该研究发现,在小鼠激光诱导脉络膜新生血管(CNV)后,血液和视网膜色素上皮/脉络膜组织中持续存在两种失调的miRNAs——mmu-mir-486a-5p和mmu-mir-92a-3p。这些发现凸显了它们在CNV相关并发症病理机制及治疗中的潜在作用,为进一步研究其功能影响和治疗潜力提供了方向。
研究不足
该研究的局限性包括不同研究中cmiRNA表达的变异性,以及需要进一步验证所识别的miRNAs作为nAMD生物标志物的有效性。功能实验仅限于体外模型,可能无法完全复现体内条件。
1:实验设计与方法选择
本研究采用激光诱导脉络膜新生血管(CNV)小鼠模型探究cmiRNA表达。首先通过RNA新一代测序技术确定全局cmiRNA表达谱,随后采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)在血液、视网膜及RPE/脉络膜组织中进行验证。
2:样本选择与数据来源
使用氩激光处理C57Bl/6小鼠诱导CNV,在不同时间点采集血液样本,并提取视网膜和RPE/脉络膜组织进行分析。
3:实验设备与材料清单
用于CNV诱导的氩激光仪、用于初始cmiRNA检测的RNA新一代测序技术、用于验证的RT-qPCR技术、用于功能实验的小鼠小胶质细胞系(BV-2)和内皮细胞系(C166)。
4:实验流程与操作步骤
在小鼠体内诱导CNV后,于特定时间点采集血液样本并提取组织。通过测序和RT-qPCR分析cmiRNA表达,利用细胞系进行功能实验评估目标miRNA的影响。
5:数据分析方法
采用截尾均值M值(TMM)算法进行数据标准化,使用线性混合效应模型分析。通过p值阈值和效应量评估统计显著性。
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获取完整内容-
Argon laser
Induction of choroidal neovascularization (CNV) in mice.
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RNA next generation sequencing
Determination of global cmiRNA expression.
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quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR)
Replication of cmiRNA expression in blood, retinal, and RPE/choroidal tissue.
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murine microglial cells (BV-2)
Functional assays to assess the impact of identified miRNAs.
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murine endothelial cells (C166)
Functional assays to assess the impact of identified miRNAs.
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