研究目的
生物样本中低水平miRNA的简单而灵敏检测。
研究成果
所提出的3CL-NPC检测法是一种简便的无酶方法，通过利用靶标模板循环点击核酸连接和MNPs的TIRFM成像技术，实现对miRNAs的高灵敏度检测。该方法对目标miRNA的检测限极低（50 fM），并能以高特异性清晰区分miRNA序列中单碱基的差异。
研究不足
论文中未明确提及实验的技术和应用限制，以及潜在的优化领域。
1：实验设计与方法选择：
该策略基于利用全内反射荧光显微镜（TIRFM）对循环点击化学连接反应（3CL）激发的荧光磁性纳米颗粒（MNPs）进行计数。每个miRNA分子触发多轮点击化学连接反应，生成大量同时带有5'-生物素和3'-荧光团的连接寡核苷酸（ODNs），从而实现高效信号放大。
2：样本选择与数据来源：
采用合成的let-7a miRNA作为模型靶标。
3：实验设备与材料清单：
链霉亲和素功能化磁性纳米颗粒（STV-MNPs，50 nm）、聚乙烯醇（PVA，分子量约61000）、玻璃盖玻片（约0.17 mm）、HPLC纯化的寡核苷酸。
4：0）、玻璃盖玻片（约17 mm）、HPLC纯化的寡核苷酸。 实验步骤与操作流程：
4. 实验步骤与操作流程：在包含P1、P2、PBST反应缓冲液及不同量目标miRNA或总RNA样本的混合液中执行3CL反应?；旌衔镌谔囟ǚ从μ跫路跤?。引入MNPs并与3CL反应混合物孵育。通过磁分离收集MNPs并分散于含PVA的PBS中。将MNPs悬浮液置于薄玻璃载玻片上，进行TIRFM成像。
5：PPBST反应缓冲液及不同量目标miRNA或总RNA样本的混合液中执行3CL反应?；旌衔镌谔囟ǚ从μ跫路跤Ｒ隡NPs并与3CL反应混合物孵育。通过磁分离收集MNPs并分散于含PVA的PBS中。将MNPs悬浮液置于薄玻璃载玻片上，进行TIRFM成像。 数据分析方法：
5. 数据分析方法：使用Image J处理获得的MNPs TIRFM图像，通过每张图像的积分荧光强度（IntDen）实现miRNA靶标的定量检测。
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PVA
MW ~61000
Sigma-Aldrich
Form a polymer film to immobilize the MNPs on the surface of the coverslip
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STV-MNPs
50 nm
Miltenyi Biotec GmbH
Fluorescence enriching carrier for miRNA detection
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Glass coverslips
~0.17 mm
Sangon
Substrate for TIRFM imaging
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