研究目的
本研究旨在描述斑马鱼弹珠巫师突变体,该突变体破坏了GET通路的核心组分Wrb。
研究成果
蛋白质Wrb和Trc40是光感受器与双极细胞之间突触传递所必需的,这表明TRC通路介导的TA蛋白插入是带状突触组装与功能的关键步骤。
研究不足
该研究的局限性在于仅关注斑马鱼幼体,可能无法完全复现人类光感受器生物学特性。此外,尚未明确GET通路破坏所影响的光感受器特异性TA蛋白。
1:实验设计与方法选择:
采用视网膜电图、视动反应测量(OKR)、免疫组织化学和电子显微镜分析来评估5日龄斑马鱼幼体的带状突触功能、蛋白质表达和超微结构。通过实时qRT-PCR和原位杂交技术研究wrb基因的表达情况。
2:样本选择与数据来源:
使用受精后5天(dpf)的斑马鱼幼体。突变体wrbhi1482最初是在一项针对影响眼部发育或功能的突变体正向遗传筛选中被发现的。
3:实验设备与材料清单:
设备包括用于实时PCR的商业化系统(CFX96;Bio-Rad实验室)、荧光显微镜(蔡司Axio Imager.Z2配Apotome.2??椋┖褪值缱酉晕⒕担ǚ衫止綯ecnai 20型,200千伏)。材料包括用于免疫组织化学和免疫印迹的抗体,以及用于敲低实验的吗啉代反义寡核苷酸。
4:实验流程与操作步骤:
将幼体黑暗适应1小时后处死并摘取眼球进行ERG记录。免疫组织化学实验中,幼体经固定、防冻处理后切片。电子显微镜样本经制备和切片后成像。
5:数据分析方法:
使用数据分析软件(IgorPro)的自定义脚本提取并分析ERG波形。统计分析通过商业软件(Prism 6)完成。
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Zeiss Axio Imager.Z2 with Apotome.2
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