研究目的
利用荧光涨落光谱技术测量相邻细胞表面、细胞接触位点处表达蛋白的结合情况。
研究成果
本实验方法适用于细胞接触界面中同型或异型蛋白质相互作用，无论细胞类型相同或不同，且可在商用共聚焦激光扫描显微镜上实施。该方法通过检测与目标蛋白基因融合的荧光蛋白提供分子特异性信息，无需荧光标记定位于细胞外表面。
研究不足
系统的稳定性需要足够高，以便在数分钟内探测目标蛋白质的扩散动力学。扩散动力学的存在是该方法有效的基本条件。对于运动极其缓慢的蛋白质复合物，该技术可能会达到其极限。
1：实验设计与方法选择
该检测结合了荧光交叉相关技术（扫描荧光交叉相关光谱法(sFCCS)、交叉相关数与亮度分析法(ccN&B)）以及表达目标蛋白（如粘附受体）融合构建体的细胞混合。通过从胞内侧面用两种光谱分离的荧光蛋白(FPs)标记两个相互作用细胞中的待研究受体。
2：样本选择与数据来源
将贴壁细胞（如HEK 293T细胞）转染目标蛋白与'绿色'或'红色'荧光蛋白的融合质粒，随后混合细胞并接种于玻璃底培养皿进行显微实验。
3：实验设备与材料清单
共聚焦激光扫描显微镜、荧光染料溶液、35毫米玻璃底培养皿、数值孔径1.2的水浸物镜、光子计数或模拟探测器。
4：实验流程与操作步骤
流程包括细胞混合、转染、接种至玻璃底培养皿，以及使用共聚焦激光扫描显微镜在细胞-细胞接触位点进行荧光涨落光谱测量。具体步骤包含仪器校准、数据采集与分析。
5：数据分析方法
数据分析涉及校正横向细胞运动的配准算法、确定荧光信号最强位置，以及计算荧光信号的自相关与互相关函数(ACFs/CCFs)。将二维扩散模型拟合至所有相关函数。
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confocal laser scanning microscope
Used for fluorescence fluctuation spectroscopy measurements at cell-cell contacts.
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water immersion objective
Used for focusing into the sample during microscopy experiments.
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photon counting or analog detectors
Used for detecting fluorescence signals during microscopy experiments.
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35-mm glass bottom dishes
#1.5
Used for placing dye solutions and cell samples during microscopy experiments.
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Used for calibrating the focal volume during microscopy experiments.
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