研究目的
开发一种新型线粒体靶向近红外荧光探针，用于生物体系中硫化氢的灵敏、选择性检测，实现对活细胞内H2S的实时成像与监测。
研究成果
Mito-NSH是一种高效近红外荧光探针，可快速、高选择性地检测线粒体H2S，且细胞毒性低。该探针成功实现了活细胞中外源性和内源性H2S的成像，展现出其在生物应用及H2S研究深入开发中的潜力。
研究不足
该探针在超越HeLa细胞的复杂生物环境中可能存在局限性，其响应速度虽快但仍可进一步优化。已注意到极高浓度其他硫醇类物质（如半胱氨酸）可能产生干扰，但影响轻微。
1：实验设计与方法选择：
探针Mito-NSH基于具有大斯托克斯位移的新型荧光团（Mito-NOH）设计，通过二硝基苯基醚的硫解反应检测H2S。方法包括合成、光谱分析、选择性测试、细胞毒性实验及细胞荧光成像。
2：样本选择与数据来源：
生物成像实验使用来自中南大学湘雅医学院的HeLa细胞?；约敛晒鹤訟damas公司。
3：实验设备与材料清单：
设备包括BRUKER 400 MHz和125 MHz核磁共振仪、LCMS-IT-TOF质谱仪、Leici PHS-3C pH计、岛津UV-2550紫外分光光度计、日立F-4600荧光分光光度计、徕卡TCS-SP5 II共聚焦显微镜、珀金埃尔默Operetta CLS高内涵分析系统及配备YMC ODS色谱柱的HPLC系统。材料包括DMSO、NaHS、PBS缓冲液及多种生物分析物。
4：实验流程与操作步骤：
通过化学反应合成化合物，色谱法纯化。在PBS缓冲液中记录吸收和荧光光谱。用NaHS进行浓度依赖性滴定。使用多种离子和分子进行选择性测试。采用MTT法进行细胞毒性实验。细胞培养及探针孵育与H2S处理后的成像。
5：数据分析方法：
荧光强度测量，以罗丹明B为标准计算量子产率，采用3σ/κ法进行检测限统计分析，使用Image Pro Plus 6.0等软件进行图像分析。
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NMR Spectrometer
BRUKER 400 MHz
BRUKER
Used for obtaining 1H NMR spectra of synthesized compounds.
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NMR Spectrometer
BRUKER 125 MHz
BRUKER
Used for obtaining 13C NMR spectra of synthesized compounds.
-
Liquid Chromatograph Mass Spectrometer
LCMS-IT-TOF
Shimadzu
Used for LC-MS analysis to characterize compounds.
-
UV-vis Spectrophotometer
Shimadzu UV-2550
Shimadzu
Used for recording absorption spectra.
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Fluorometer
Hitachi F-4600
Hitachi
Used for recording fluorescence spectra.
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Confocal Microscope
Leica TCS-SP5 II
Leica
Used for obtaining fluorescence images of cells.
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High-Content Analysis System
PerkinElmer Operetta CLS
PerkinElmer
Used for cell imaging and analysis.
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HPLC System
HP 1100 series
Agilent Technologies
Used for purity analysis of compounds.
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pH Meter
Leici PHS-3C
Leici
Used for determining pH of solutions.
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Rhodamine 123
Used as a commercial mitochondrion marker for co-localization tests.
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