研究目的
审查当前及新兴的细胞外囊泡（EVs）成像方法，以促进在生物和治疗背景下对其时空特性的准确监测与研究。
研究成果
细胞外囊泡成像对于理解其生物学特性和治疗应用至关重要，但需要谨慎选择标记和成像方法以确保准确性。未来的发展应着眼于减少伪影，并实现长期、精确的追踪，以用于临床前和临床研究。
研究不足
该综述指出了若干局限性，包括样本制备产生的伪影（如电镜脱水导致囊泡呈杯状）、染料留存时间超过囊泡本身从而产生假信号、电穿孔等标记方法可能造成囊泡融合或形态改变，以及需谨慎考虑报告分子特性以避免空间位阻或改变囊泡功能。
1：实验设计与方法选择：
综述讨论了多种成像技术（包括电子显微镜TEM、SEM、冷冻电镜）、原子力显微镜AFM、光学显微镜（生物发光与荧光成像）及临床工具（SPECT、PET、MRI），以及标记策略如荧光蛋白、有机染料和放射性标记。
2：样本选择与数据来源：
细胞外囊泡（EVs）来源于多种细胞类型（如癌细胞、干细胞），采用差速超速离心等方法分离获取。
3：实验设备与材料清单：
包含显微镜（如TEM、SEM、AFM）、成像系统（如IVIS、CCD相机）、染料（如DiR、PKH67）及造影剂（如USPIO、99mTc-HMPAO）。
4：实验流程与操作规范：
描述样本制备（固定、标记）、成像过程及体内给药途径（如静脉注射）。
5：数据分析方法：
涉及生物分布图像分析、EV特性量化及统计学比较。
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Transmission Electron Microscope
TEM
Used for imaging the structure of EVs with high resolution.
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Scanning Electron Microscope
SEM
Used for surface topography imaging of EVs.
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Cryo-Electron Microscope
Cryo-EM
Used for imaging EVs in their native hydrated state.
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Atomic Force Microscope
AFM
Used for topographic imaging and quantification of EVs.
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In Vivo Imaging System
IVIS
Used for in vivo imaging of bioluminescent or fluorescent EVs.
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Charge-Coupled Device
CCD
Used for detecting bioluminescence or fluorescence signals.
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Dye
DiR
Lipophilic dye for labeling EV membranes for fluorescence imaging.
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Dye
PKH67
Lipophilic carbocyanine dye for EV labeling.
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Dye
R18
Lipid labeling dye for studying EV fusion with cells.
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Contrast Agent
USPIO
Ultra-small superparamagnetic iron oxide nanoparticles for MRI contrast in EV imaging.
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Radioisotope
99mTc-HMPAO
Used for SPECT imaging of EVs.
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Ultracentrifuge
UC
Used for isolating EVs from cell culture media.
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