1：实验设计与方法选择：

本研究采用FRET策略，通过将AIE分子（TB）作为供体与商业化近红外染料（NIR775）作为受体共包封于两亲性聚合物（PSMA）中形成纳米颗粒。采用自组装法制备纳米颗粒，并通过PEG表面修饰实现生物相容性。选用双光子荧光显微镜进行深层组织成像。

2：样本选择与数据来源：

AIE分子TB按既往方法合成，NIR775为商业化采购。制备了NIR775与TB质量比2%-9%的纳米颗粒。体内成像实验使用ICR小鼠。

3：实验仪器与材料清单：

仪器包括紫外-可见分光光度计（岛津UV-3600）、荧光分光光度计（Ocean Optics Maya2000Pro）、动态光散射与zeta电位分析仪（马尔文Zetasizer Nano ZS）、透射电镜（JEOL JEM-2100F）、配备fs激光（1040 nm，150 fs，50 MHz）的双光子荧光测量系统及光纤光谱仪（Ideaoptics PG2000）。材料包含THF、EDC、NHS、PEG-NH2、PSMA、MTT、DMEM和去离子水。

4：0）、荧光分光光度计（Ocean Optics Maya2000Pro）、动态光散射与zeta电位分析仪（马尔文Zetasizer Nano ZS）、透射电镜（JEOL JEM-2100F）、配备fs激光（1040 nm，150 fs，50 MHz）的双光子荧光测量系统及光纤光谱仪（Ideaoptics PG2000）。材料包含THF、EDC、NHS、PEG-NHPSMA、MTT、DMEM和去离子水。 实验流程与操作步骤：

4. 实验流程与操作步骤：将TB、PSMA和NIR775储备液混合于THF中，超声条件下加水稀释，蒸发THF后过滤制得纳米颗粒。表面修饰通过EDC/NHS活化及PEG偶联实现。采用MTT法检测HepG2细胞毒性。双光子成像在尾静脉注射纳米颗粒后，使用1040 nm fs激光对小鼠脑部血管进行成像。

5：数据分析方法：

通过吸收与发射光谱分析FRET效率，测量荧光寿命计算FRET效率。细胞毒性数据以细胞存活率百分比分析。成像数据经Z轴荧光图像堆叠处理。