研究目的
开发并优化一种无酶双杂交方法，用于微阵列上mRNA的特异性检测，避免逆转录和扩增步骤带来的偏差。
研究成果
双杂交方法实现了微阵列上无酶、特异性mRNA检测并减少偏差。较长的特异性捕获序列可增强信号，间隔序列对短探针有益。该方法为无酶促假象的直接mRNA分析奠定了基础。
研究不足
该研究仅限于一个看家基因（RPLP0），可能无法推广至其他基因。多重检测能力尚未充分探索，且该方法需针对不同mRNA靶标进行优化。潜在局限性包括杂交过程中的表面效应和空间位阻。
1：实验设计与方法选择：
该研究采用双杂交方法，通过mRNA与微阵列上DNA捕获探针的杂交进行固定，并用Cy5标记的DNA探针进行标记。此方法避免了逆转录和PCR等酶促步骤。
2：样本选择与数据来源：
使用RNeasy Mini Kit从人胰腺癌细胞系Panc-1中提取总RNA。
3：实验设备与材料清单：
关键设备包括Microgrid II接触式点样仪、Axiovert 200显微镜，以及Sigma-Aldrich和Qiagen等供应商提供的各种缓冲液和试剂。材料包括环氧功能化基底、氨基修饰的DNA探针和Cy5标记探针。
4：实验流程与操作步骤：
通过点样捕获探针制备微阵列，随后在受控条件下（如70°C变性，40°C过夜杂交）使RNA与标记探针杂交。使用荧光显微镜进行检测。
5：数据分析方法：
使用MATLAB分析斑点亮度，SigmaPlot进行统计分析（包括单因素方差分析）。
独家科研数据包，助您复现前沿成果，加速创新突破
获取完整内容-
Axiovert 200 inverted microscope
Axiovert 200
Zeiss
Used for fluorescence microscopy to image the microarrays.
立即获取同款设备 -
α-Plan FLUAR 100x objective
α-Plan FLUAR 100x
Zeiss
Microscope objective for high-resolution imaging.
暂无现货
预约到货通知
-
Microgrid II contact-printer
Microgrid II
ArrayIt
Used for printing DNA capture probes onto microarray substrates.
暂无现货
预约到货通知
-
SMP2 stealth pins
SMP2
ArrayIt
Pins used with the Microgrid II printer for spotting probes.
暂无现货
预约到货通知
-
CoolSnap HQ CCD camera
CoolSnap HQ
Photometrics
Camera attached to the microscope for capturing fluorescence images.
暂无现货
预约到货通知
-
iBeam diode laser
iBeam
Toptica Photonics AG
Laser used for fluorescence excitation at 642 nm.
暂无现货
预约到货通知
-
RNeasy Mini Kit
RNeasy Mini Kit
Qiagen
Used for isolation of total RNA from cells.
暂无现货
预约到货通知
-
NEXTERION Slide E
NEXTERION Slide E
Schott Technical Glass Solution GmbH
Epoxy-functionalized glass substrates for microarray fabrication.
暂无现货
预约到货通知
-
LifterSlip
LifterSlip
Science Services
Glass coverslip used during hybridization to contain the sample.
暂无现货
预约到货通知
-
TempControl 37-2 digital objective heater
TempControl 37-2 digital
PeCon
Heater to maintain temperature during microscopy measurements.
暂无现货
预约到货通知
-
登录查看剩余8件设备及参数对照表
查看全部
