研究目的
开发一种具有大斯托克斯位移的红色发射荧光探针,用于在活细胞中高选择性地实时检测半胱氨酸,并区分谷胱甘肽和同型半胱氨酸。
研究成果
探针CP是一种高选择性、高灵敏度且响应迅速的荧光工具,可用于活细胞中半胱氨酸(Cys)的实时追踪。其低细胞毒性和大斯托克斯位移特性使其具备生物应用潜力。
研究不足
该探针在受控细胞培养之外的复杂生物环境中可能存在局限性;未测试的其他硫醇或活性物质可能产生潜在干扰;体内应用需进一步优化。
1:实验设计与方法选择:
基于迈克尔加成和分子内环化机制,以P-OH为荧光团、丙烯?;侗鸬ピ杓铺秸隒P,用于选择性检测半胱氨酸(Cys)。
2:样本选择与数据来源:
选用生物相关分析物(包括Cys、谷胱甘肽GSH、同型半胱氨酸Hcy及其他氨基酸);培养HeLa细胞进行细胞成像。
3:实验仪器与材料清单:
仪器包含紫外-可见分光光度计、荧光分光光度计、共聚焦激光扫描显微镜、核磁共振仪、质谱仪;材料包括丙烯酰氯等化学试剂、溶剂及细胞培养试剂。
4:实验步骤与操作流程:
合成CP和P-OH,在PBS-DMSO缓冲液中进行光谱测定,开展时间依赖性实验与滴定实验、选择性测试、pH效应研究、细胞毒性检测以及HeLa细胞的共聚焦成像。
5:数据分析方法:
监测荧光强度变化;采用DL=3σ/k公式计算检测限;对细胞活性及成像数据进行统计分析。
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