研究目的
开发一种新型纳米传感器,利用由新型共轭聚合物(P1)制备的小尺寸共轭聚电解质点(Pdots),实现对植酸(PA)的选择性和高灵敏度检测,从而能够对生物样本中的PA进行超灵敏检测和成像。
研究成果
小型Pdot-1纳米传感器通过Fe3?配位介导的荧光"关-开"机制,实现了对植酸的超灵敏(检测限10 nM)和选择性检测。该传感器具有低细胞毒性,成功应用于细胞提取物中的PA检测及活细胞成像,展现出优异的生物相容性,在生物与环境监测领域具有重要应用潜力。
研究不足
该检测对pH敏感,在弱酸性条件(pH 5.9)下性能最佳,这可能限制其在中性或碱性环境中的应用。该方法需要特定的孵育时间(最长25分钟)以实现荧光恢复,可能会减缓高通量应用的速度。复杂样品中其他螯合剂或金属离子的干扰可能影响选择性,不过在测试条件下该探针显示出高度特异性。
1:实验设计与方法选择:
本研究采用改进的再沉淀法,以共轭聚合物P1合成小尺寸P点。其传感机制基于Fe3?通过电子转移导致荧光猝灭,以及PA加入后因与Fe3?强螯合作用使荧光恢复。
2:样本选择与数据来源:
样本包括合成Pdot-1、植酸、金属离子、阴离子、玉米籽粒样品及HeLa细胞提取物。数据源自荧光光谱、紫外-可见吸收、透射电镜、Zeta电位及共聚焦成像。
3:植酸、金属离子、阴离子、玉米籽粒样品及HeLa细胞提取物。数据源自荧光光谱、紫外-可见吸收、透射电镜、Zeta电位及共聚焦成像。 实验设备与材料清单:
3. 实验设备与材料清单:设备包含日立F-7000荧光分光光度计、UV-2450紫外可见分光光度计、PHS-3C pH计、JEM-2010透射电镜、Zetasizer Nano ZS粒度仪、徕卡TCS SP8共聚焦显微镜、KQ-250E超声仪及旋转蒸发仪。材料包括P1聚合物、PEG-300-COOH、植酸、Fe3?离子、缓冲液(HAc-NaAc、Tris-HCl)及细胞培养试剂(RPMI 1640、DMEM、FBS、MTT)。
4:DMEM、FBS、MTT)。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:Pdot-1合成步骤为将PEG-300-COOH溶于水,加入P1溶液,超声处理,旋转蒸发,离心分离及过滤。PA检测通过将Pdot-1与Fe3?及PA在缓冲液中孵育后测定荧光强度。细胞实验包含MTT法细胞毒性测试及共聚焦显微镜细胞成像。
5:数据分析方法:
通过分析荧光强度变化确定PA浓度,计算线性范围与检测限。统计分析包括校准曲线相关系数及细胞存活率评估。
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Fluorometer
F-7000
Hitachi
Used for fluorescence measurements to detect changes in fluorescence intensity of Pdot-1 in the presence of Fe3+ and PA.
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Spectrophotometer
UV-2450
Shimadzu
Recorded UV-visible absorption spectra for characterization of materials.
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Transmission Electron Microscope
JEM-2010
JEOL
Performed TEM characterization to determine the size and morphology of Pdot-1.
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Zeta Potential Analyzer
Zetasizer Nano ZS
Malvern
Acquired zeta potential of Pdot-1 samples to monitor surface charge changes under different conditions.
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Confocal Laser Scanning Microscope
TCS SP8
Leica
Used for confocal imaging of live cells to visualize fluorescence recovery and PA imaging.
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pH Meter
PHS-3C
Shanghai Pengshun Scientific Instrument Co.
Measured pH values of buffer solutions used in experiments.
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Sonicator
KQ-250E
Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.
Sonicated mixtures during Pdot-1 synthesis to achieve clear solutions.
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Polyethylene Glycol
PEG-300-COOH
Shanghai Jinpan Biotech Co., Ltd.
Used as a stabilizer in the synthesis of small-sized Pdots to enhance dispersion and stability.
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