研究目的
开发一种线粒体靶向的比率型双光子荧光探针,用于高选择性、高灵敏度和高光稳定性地可视化线粒体中的多硫化氢(H2Sn)。
研究成果
Mito-NRT-HP是一种高效靶向线粒体的比率型双光子荧光探针,能以优异的选择性、灵敏度和光稳定性检测H2Sn。该探针可绘制线粒体内源性H2Sn分布图谱,在LPS诱导的器官损伤诊断中具有应用潜力,为研究H2Sn的生物功能提供了有力工具。
研究不足
在过量竞争性生物硫醇(如谷胱甘肽)存在时,探针的响应时间可能延长。该研究主要展示了在细胞系和小鼠模型中的应用;更广泛的生物系统和临床应用需进一步验证。双光子激发所需的高强度脉冲激光器可能会限制其普及性。
1:实验设计与方法选择:
探针Mito-NRT-HP基于萘酰亚胺衍生物设计,含三苯基膦基团用于线粒体靶向,以及2-氟-5-硝基苯甲酸酯部分作为H2Sn受体。其传感机制涉及H2Sn诱导的亲核取代和分子内环化反应,产生比率型荧光响应。
2:样本选择与数据来源:
体外成像使用HeLa和BHK细胞;离体成像采用LPS诱导的急性器官损伤模型小鼠(肠道、肺、肝、肾、脾)组织样本。
3:实验仪器与材料清单:
仪器包括JNM-ECS 400M核磁共振波谱仪、布鲁克Esquire 6000离子阱质谱系统、爱丁堡FLS920荧光光谱仪(量子产率与双光子荧光检测)、瓦里安Cary 5000紫外-可见-近红外分光光度计、日立F-7000分光光度计、徕卡TCS SP8共聚焦显微镜、奥林巴斯FV1000 MPE双光子显微镜。试剂包含市售化学品、线粒体红色追踪染料CMXRos、溶酶体红色追踪染料DND-99、CellTiter 96? AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒。
4:CellTiter 96? AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒。 实验流程与操作步骤:
4. 实验流程与操作步骤:Mito-NRT-HP通过多步有机合成制备。光谱研究在PBS缓冲液中进行。细胞培养与成像包括探针孵育及不同处理(如Na2S2、NMM、LPS、L-半胱氨酸)。体内实验中,小鼠先注射LPS或生理盐水,再注射Mito-NRT-HP后取组织成像。
5:NMM、LPS、L-半胱氨酸)。体内实验中,小鼠先注射LPS或生理盐水,再注射Mito-NRT-HP后取组织成像。 数据分析方法:
5. 数据分析方法:分析荧光光谱强度比(I546 nm/I478 nm,I470 nm/I532 nm)。以荧光素为参比测定双光子吸收截面。采用MTS法评估细胞活力。通过荧光强度分布图和散点图进行共定位分析。
独家科研数据包,助您复现前沿成果,加速创新突破
获取完整内容-
Ion Trap System
Esquire 6000
Bruker
Performing ESI-MS for mass spectrometry analysis.
暂无现货
预约到货通知
-
Spectrophotometer
FLS920
Edinburgh Instrument
Measuring absolute quantum yield and two-photon fluorescence.
-
Spectrophotometer
F-7000
Hitachi
Recording fluorescence spectra.
-
Confocal Microscope
TCS SP8
Leica
Performing one-photon fluorescence imaging.
暂无现货
预约到货通知
-
Two-Photon Microscope
FV1000 MPE
Olympus
Performing two-photon fluorescence imaging.
暂无现货
预约到货通知
-
NMR Spectrometer
JNM-ECS 400M
JNM
Recording 1H NMR and 13C NMR spectra for compound characterization.
暂无现货
预约到货通知
-
pH Meter
pH-10C
Measuring pH values of solutions.
暂无现货
预约到货通知
-
UV-Vis-NIR Spectrophotometer
Cary 5000
Varian
Recording absorption spectra.
暂无现货
预约到货通知
-
Microplate Reader
Model 680
BIO-RAD
Measuring optical densities for cell viability assays.
暂无现货
预约到货通知
-
Mito Tracker Red
CMXRos
Staining mitochondria for co-localization studies.
暂无现货
预约到货通知
-
Lyso Tracker Red
DND-99
Staining lysosomes for co-localization studies.
暂无现货
预约到货通知
-
Cell Proliferation Assay
CellTiter 96? AQueous One Solution
Promega
Assessing cell viability using MTS reagent.
暂无现货
预约到货通知
-
登录查看剩余10件设备及参数对照表
查看全部