研究目的
设计一种简单可行的传感策略,利用适配体传感器偶联多功能磁珠并结合动态光散射技术,实现对低丰度蛋白质(特别是癌胚抗原CEA)的灵敏检测。
研究成果
所开发的基于动态光散射的适配体传感器提供了一种简单、无酶且低成本的CEA灵敏检测方法,通过控制目标抗体,该方法还有望适用于其他蛋白质或生物分子。
研究不足
该研究未讨论实际应用中复杂生物基质可能产生的干扰,也未涉及该方法在高通量筛选中的可扩展性。
1:实验设计与方法选择:
本研究采用夹心型检测格式定量监测CEA,使用适配体功能化磁珠和动态光散射(DLS)技术。
2:样本选择与数据来源:
测试了不同浓度的CEA标准品,并监测了含不同浓度CEA的人血清样本。
3:实验设备与材料清单:
羧基化磁珠(尺寸:50 nm,25 mg mL-1,1.3 × 1016 颗粒/g,Chemicell GmbH)、N-羟基琥珀酰亚胺、N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐、CEA适配体、透射电镜(H-7650,日立仪器)、DLS(马尔文Zetasizer纳米应用软件)、傅里叶变换红外光谱仪(Vector 22,布鲁克)。
4:3 × 1016 颗粒/g,Chemicell GmbH)、N-羟基琥珀酰亚胺、N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐、CEA适配体、透射电镜(H-7650,日立仪器)、DLS(马尔文Zetasizer纳米应用软件)、傅里叶变换红外光谱仪(Vector 22,布鲁克)。 实验步骤与操作流程:
4. 实验步骤与操作流程:通过碳二亚胺偶联法将适配体共价结合到磁珠上。制备的Apt-MB用于CEA检测,方法是将不同浓度的标准品加入等体积的Apt1-MB和Apt2-MB混合液中。
5:数据分析方法:
通过DLS监测平均流体力学直径(DH)的变化来评估目标CEA的浓度。
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获取完整内容-
TEM
H-7650
Hitachi Instruments
Used for imaging aptamer-conjugated magnetic beads.
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DLS
Malvern Zetasizer nanoapplication software
Malvern
Used for determining the average hydrodynamic diameter (DH) of particles.
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FTIR
Vector 22
Bruker
Used for the bioconjugation analysis.
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carboxylated magnetic beads
50 nm, 25 mg mL-1, 1.3 × 1016 particles g-1
Chemicell GmbH
Used as the base material for aptamer conjugation in the sensing strategy.
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